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細胞增殖檢測作為一種實驗技術方法, 不僅在研究細胞的基本生物學特征中非常重要, 而且是分析細胞狀態、研究遺傳性狀和評估應激反應的一種基本方法。hjc黄金城細胞增殖檢測服務提供了一種靈敏度高、經濟的細胞增殖檢測服務。細胞增殖的檢測方法主要包括:BrdU,CCK8,EdU等,其中EdU檢測方法是最新的細胞增殖檢測方法。我們擁有一支專業的細胞水平團隊為您服務,如需詳情請聯係我們。
備注:如果細胞株需要購買,細胞費用和運費由客戶支付。
細胞毒性分析
細胞凋亡檢測分析
細胞遷移分析
細胞侵襲分析
HTRF 細胞水平檢測分析
免疫染色分析
免疫熒光分析(96/384 孔板)
報告基因分析(綠色熒光蛋白/熒光素酶)
放射性配體受體結合試驗
細胞攝取分析
基因敲除分析
MicroRNA過表達分析
MicroRNA 敲除分析
有關腺病毒/逆轉錄病毒/慢病毒 載體的應用分析
hjc黄金城建立了100多種細胞株用於細胞水平測定。
乳腺癌細胞
大腸癌細胞
白血病細胞
肝癌細胞
腎癌細胞
肺癌細胞
黑素瘤細胞
卵巢癌細胞
胰腺細胞
胃癌細胞
方法一:EdU
EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在複製的DNA分子中,通過基於EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應快速檢測細胞 DNA 複製活性,適用於細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA 修複、病毒複製、細胞標記示蹤等方麵的研究,尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。
與BrdU檢測方法相比,EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準確。EdU與T非常相似,而EdU染料隻有BrdU抗體的1/500,在細胞內很容易擴散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免樣品損傷,而且無需抗原抗體反應,能在細胞和組織水平更準確地反映 DNA 複製活性。
方法二:CCK-8
CellCountingKit-8簡稱CCK-8試劑盒,是一種基於WST-8的廣泛應用於細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-8是一種類似於MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對於同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關係。
CCK-8的原理跟MTT其實是相同的,不同之處在於CCK-8法生成的formazan是水溶性的,不需要再吸出培養液加入有機溶劑溶解這個步驟,因此可以減少一定的誤差。其他優點就是重複性優於MTT;對細胞毒性小;為1瓶溶液,毋需預製,即開即用。但是CCK-8比MTT的價格要貴不少。
服務內容:用CCK-8(Cell Counting Kit-8)試劑盒檢測細胞增殖、細胞毒性,CCK-8為MTT法的代替方法,可用於藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。
方法三:MTT
又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數範圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。
優點:經濟、靈敏度高,可用於大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。
缺點:由於MTT經還原所產生的formazan結晶產物不溶於水,需有機溶劑溶解後才能檢測,這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的準確性產生影響,而且有機溶劑對實驗人員也有損害。
服務內容:細胞培養與接種;處理(如藥物處理等);MTT檢測及數據分析;技術服務報告提交。
方法四:BrdU
Brdu,即5-Bromo-2'-Deoxyuridine,中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活體注射或細胞培養加入,而後利用抗Brdu單克隆抗體,ICC染色,顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物,雙重染色,可判斷增殖細胞的種類,增殖速度,對研究細胞動力學有重要意義。
BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)法檢測細胞增殖原理:BrdU是胸腺嘧啶的衍生物,常用於標記活細胞中新合成的DNA,可代替胸腺嘧啶選擇性整合到複製細胞中新合成的DNA中(細胞周期S期)。這種摻入可以穩定存在,隨著DNA複製進入子細胞中。 BrdU 特異性抗體可以用於檢測BrdU的摻入,從而判斷細胞的增殖能力。
BrdU 是光敏型,所以必須在黑暗中加入。細胞加了 BrdU 以後也可能光敏感,因此也在黑暗中培養。加入
BrdU 的時間和濃度根據細胞的類型和複製時間來確定,範圍在 15 分鍾到 2 個小時,濃度從 10μM 到 100μM。
例如,處理鼠胚胎成纖維細胞為 30μM 處理 60 min。
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