穩定細胞株構建篩選公司

    上海hjc黄金城生物醫藥股份有限公司提供從動物模型到細胞功能檢測的全程技術服務，擁有專業的穩定細胞株構建人員，在細胞功能檢測領域可以進行細胞遷移、侵襲、凋亡、周期、增殖檢測、細胞藥物篩選等技術服務。穩定表達細胞株指在細胞中持續穩定表達特定基因或幹擾特定基因表達。穩轉細胞株的目的基因質粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩定表達該基因或持續幹擾目的基因。

穩定細胞株服務項目
1、基因過表達穩轉細胞細胞係構建服務（基因過表達多克隆細胞株構建服務、基因過表達單克隆細胞株構建服務）：因過表達細胞株構建服務包括目的基因過表達慢病毒載體構建、病毒包裝、細胞轉染和篩選。您隻需提供目的基因的cDNA質粒和需要構建的細胞係，我們將按照您的要求完成目的基因過表達細胞株的構建和檢測，提供給您高質量的基因過表達穩定細胞株。
2、RNAi基因敲減穩轉細胞株篩選服務（RNA幹擾基因敲減細胞株多克隆構建服務、RNA幹擾基因敲減細胞株單克隆構建服務）：  英茂盛業的RNAi基因敲減細胞係構建基於慢病毒表達係統，一般采用U6啟動子驅動的pLVshRNA-puro或pLVshRNA-EGFP(2A)puro載體構建RNA幹擾穩定細胞株，服務內容包括幹擾載體構建、靶點篩選、幹擾效率驗證及穩定細胞篩選和克隆。

    3、CRISPR基因敲除穩定細胞株構建服務：隨著talen和Cas9/gRNA基因敲除係統的出現，基因定點敲除的難度大幅下降。全新的技術將基因敲除從價格高昂，耗時漫長的ZNF係統，逐漸變成簡便的研究工具。現在我們可提供Talen和Cas9/gRNA兩個係統的基因敲除服務。包括基因敲除靶點設計，talen質粒組裝，Cas9/gRNA質粒構建及基因敲除效率驗證。 

穩定轉染細胞株服務流程
a、載體構建：將外源基因構建到合適的載體上。
b、細胞篩選濃度測定：以10-14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
c、細胞接種：轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞應達到60%-80%覆蓋。
d、細胞轉染：用構建好的載體轉染目的細胞。
e、使用抗生素對細胞進行篩選。
f、篩選結果鑒定。

穩定細胞株篩選方法

    1、轉染質粒後，單克隆方法篩選穩定細胞係：對大多數細胞轉染效率較低。對於基因過表達，如果轉染效率達到40%，基因過表達尚可。但是對於基因幹擾實驗，對轉染效率要求遠遠高於基因過表達，通常質粒轉染無法滿足。

另外，質粒遊離於細胞質中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目；質粒轉染整合幾率極低，穩定細胞株構建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2、病毒感染篩選穩定細胞株：病毒感染方法較質粒轉染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩定細胞係篩選方法。用慢病毒製備穩轉細胞株，由於其高效整合、高效轉錄、高效表達、宿主範圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發生基因重排，是製備穩定細胞株的理想載體。

服務特點
1、穩定：保證15代以內穩定轉染細胞穩定表達。
2、迅速：一般控製在1個月以內完成構建。
3、經濟：價格實惠，性價比高。
4、質量保證：對外源基因進行嚴格鑒定。

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