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單B細胞抗體製備

hjc黄金城提供單B細胞抗體製備技術服務，包括單B細胞分選和單B細胞Ig基因轉錄,擴增,測序等。單B細胞抗體製備技術是目前新型、高效的抗體發現方法之一，具有速度快、通量高、以及抗體重輕鏈可變區天然配對的優勢。
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  • 單克隆抗體(mAb)是許多診斷應用和研究的重要工具。此外，單克隆抗體已成為許多疾病的理想治療用品，在癌症、自身免疫性疾病和感染性疾病的治療中得到了很好的應用。為了研究和治療目的，已有許多技術用於生成單克隆抗體。單B細胞抗體製備技術是近些年新發展的一種製備單抗的技術。該方法具有速度快、通量高、以及抗體重輕鏈可變區天然配對的優勢，是目前新型、高效的抗體發現方法之一。

    單B細胞抗體製備平台.jpg

    單B細胞抗體製備的原理是每個B細胞隻含有一對功能性的重鏈和輕鏈，每個B細胞具有隻產生一種特異性抗體的特性，所以可以直接從單個B細胞中擴增出抗體基因獲得單抗。

  • 單B細胞抗體製備流程

    單B細胞抗體製備流程.png

  • 單B細胞分選

    根據研究應用，可以隨機或抗原選擇性地從外周血或淋巴組織(如骨髓、脾髒)中分離單B細胞。對於B細胞分離，目前單B細胞分選方式有流式細胞分選法、 磁珠細胞分選法、 顯微操作法、 激光顯微切割法以及微流控分選法。 其中流式細胞熒光分選技術 (Fluorescence activated Cell Sorting，FACS)是目前一種成熟、 有效的單細胞分選方法。

    FACS.png

  • 單B細胞Ig基因轉錄,擴增,測序

    從單個B細胞中構建互補DNA (cDNA)為同時分析表達的IgH和IgL鏈基因提供了一種正確的方法。通常，單B細胞cDNA合成是在用於細胞沉積和細胞裂解的設備中進行的(例如96孔板、納米孔芯片等)，這確保了方便處理大量樣品並將交叉汙染的風險降至最低。全長Ig可變區基因轉錄物通過巢氏PCR進行擴增，其中RT-PCR產物可作為第一輪PCR的樣品進行進一步反應。

    無論使用何種Ig可變區基因擴增策略，編碼抗體特異性的單B細胞Ig可變區基因轉錄信息隨後通過測序得到。然後利用各種數據庫，如NCBI的IgBLAST、IMGT，可以很容易地識別和分析重排的V、D和J基因片段是否存在突變、插入和缺失。

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