生物仿製藥前方之路

當生物仿製藥產品在美國仍然必須得到批準、在歐洲有且隻有三個產品 上市的情況下，其在印度和中國的發展正突 飛猛進、大步向前。在印度，醫藥行業由仿 製藥公司占主導地位並推動發展，這些公司 利用重新設計化學生產工藝的技能，建立了繁 榮發展的業務。按照這種說法，生物仿製藥領 域也取得新的重要發展，這可能令人感到毫無 意外。正如小分子仿製藥，該國極有潛力成為 世界上生物仿製藥產品的主導國家。

在印度，已經有20多家公司積極地活 躍於生物仿製藥領域。事實上，根據全球行 業分析家報道，該國的生物仿製藥市場幾乎 將要翻三番，從2011年的4.84億美金增長到 2016年的14億美金。很多生物仿製藥產品已 經用於病人，這些藥品包括:已經以生物仿製 藥形式在歐洲上市的促紅細胞生成素，到仍 有待獲得歐盟監管部門批準的、包括例如利 妥昔在內的單細胞克隆抗體。

去年，印度政府出台了生物仿製藥管理 指南。該管理指南在行業和學術部門的協同 合作下，由中央藥品標準控製機構和生物技 術部製定，建立從一個生物活性類似物到市 場化的生物仿製藥的正式監管途徑。並且， 它製定了其生產過程和質量控製的規格要求 以及上市前必需的注冊工作，包括臨床前和 臨床研究，質量可比較性研究以及上市後的 監管要求。

一個生物仿製藥若需在印度批準上市， 在該國市場上必須有已經授權上市的產品進 行比較，包括完整數據包，或者已經批準並 在該國銷售至少4年。在出現全國性的醫療 緊急事件時或者對於適應症沒有其它的治療 方法時，這個4年期限的規定可以免除或縮 短。該指導意見書適用於國內研發和進口到 印度的生物仿製藥。

同時，盡管中國即將麵世的管理指南 在過去幾個月得到業內的高度讚揚，但截止 到2013年6月，該國的食品藥品監督管理局 （SFDA）仍沒有下發正式的生物仿製藥管理 指南。中國藥監局在指導意見書上一直和美 國FDA協同合作，其內容將會非常類似於美 國去年公布的版本。當前，雖然這類指南觸 手可及，但2007年下發的生物藥品規定，仍 然沒有將生物仿製藥進行明確的產品歸類。 實際上，它們的確需要進行臨床三期試驗。

盡管正式的管理指南並未出台，生物仿 製藥品在中國已經出現了近1/4世紀。早在 1989年乙型幹擾素產品即登陸中國市場，現 在包括單克隆抗體在內的多達350種生物仿 製藥產品在市場上進行銷售。根據Deloitte 報道，生物仿製藥市場極度看好。當前，雖 然生物仿製藥產品占有10%的中國藥品市 場，但其年增長率仍接近1/3。來自於Kantar Health的數據顯示，2013年37億美金的藥品 市場銷售額中，單克隆抗體到2015年將占有 大約1/3的生物仿製藥銷售，屆時常用的生物 仿製藥相較於原研產品將出現60%的折扣。 相比之下，歐洲常用生物仿製藥品僅僅便宜 大約20%。

歐洲生物仿製藥之路

隨著印度公司開始執行政府新出台的 管理指南、中國公司正在等待，思考歐盟區 域的管理指南落實情況將不無裨益。第一個 在歐洲上市的生物仿製藥是基因重組人生長 素，來自Sandoz公司，其原研藥品是Pfizer 公司2006年上市的生長激素藥品Genotropin (somatropin)，現在其它幾家公司也上市了生 長激素的生物仿製藥品。另有兩個生物藥品也以仿製藥形式在歐洲上市，並有多家供應商：治療貧血 的紅細胞生成素（仿製來自於安進公司的Epogen產品和楊 森公司的Procrit產品）和治療嗜中性白血球減少症的重組人 白細胞生成素（仿製來自安進公司的Neupogen產品）。

在第一個生物仿製藥品於2004批準前，歐盟管理指南 就已經執行了數年。有趣的是，在做出一個藥品是否符合 生物仿製藥的要求在於其分析程序和生產過程的決定後， 歐盟迄今在臨床實踐和監管過程上，都沒有正式的生物仿 製藥定義。該管理指南要求必須進行比較性研究，因為它 可以證明生物仿製藥和參照品在質量、安全和有效性上是 幾乎相同的。

然而，歐盟迄今仍沒有批準單克隆抗體的生物仿製藥 上市。那些已經上市的生物仿製藥是天然生長激素和細胞 因子的市場化產品。一套完整的單克隆抗體管理指南草案 在2011年下發，Sandoz在當年六月宣布該公司將開展依 拉西普（商品名Enbrel）生物仿製藥三期臨床試驗，該藥 物是Pfizer公司治療自體免疫失調的單克隆抗體藥物。

對於獲批的生物仿製藥產品，EMA要求的臨床試驗不 盡相同。這些產品實際上是幾乎相同但非完全相同。糖基 化代謝模式可能不同，例如，眾多的雜質圖譜。但是，從 根本上來說，這些產品和原研藥有著相同的生物效應，並 證明了其安全性和令人信服的質量。

生物仿製藥市場潛力巨大

此外，更近的美國管理指南大綱提出了很多重要的 不同之處。相較於歐洲的現狀，美國管理指南給出了生物 仿製藥的定義，並規定其必須和參照藥物高度相似，在安 全性、純度或效能方麵，在臨床上沒有明確的差異。這份 最新的指南要求生物仿製藥必須和原研藥物擁有同樣的療 效、審批途徑以及作用機理。

回到歐洲來說，為了證明生物相似性，製藥公司必 須在理化特點和功能性上進行廣泛而給力的比較性研究。 從某種意義上來說，因為生產原研藥的過程是非公開的信 息，在開始階段製藥公司往往在黑暗中摸索前行。原研藥 物和任何生物仿製藥間不可避免存在差異，因為發酵過程 中一丁點的小變化都可能導致生物效應的不同。這也是為 什麽必須進行一套全麵的比較性研究。

不同的生物過程導致雜質圖譜的差異。因此，與產品 和生產過程相關的任何雜質必須進行識別、定性和定量， 然後與原研藥進行比較。任何其它加入到製劑中的物質必 須以這種方式進行評估，確保該生物仿製藥和參照製劑， 在其安全性、純度或效能上沒有負麵的影響。必須對任何 差異進行描述並對其造成的影響經討論後置於上市授權批 準文件中。

化學相似性評估

當確定生物仿製藥和其參照藥品是否高度相似時， 必須考慮很多的因素。首要考慮的是其表達係統。這包括 正轉染的細胞株、轉基因係列、任何啟動子的性質和其 它控製區的確認、係統的基因同一性和穩定性、主細胞庫 和有限的處於體外細胞階段的細胞。基因拷貝數也非常重 要，正如基因測序過程以及其是否參與mRNA或cDNA。 同樣，也要求進行熒光原位雜交（FISH）和限製酶分析。

第二，必須考慮其生產過程。除了產品表達水平和內 源性逆轉錄粒子的表達外，細胞株、糖基化結構和引入的 異質性應進行調查。並且，細胞的生存能力和產率，產品 的完整性、降解產物以及宿主細胞蛋白和DNA的水平也必 須進行研究和測試。

對發酵產品的性質產生巨大影響的另一因素是生產中 所使用的培養基。是否含有血清？是否存在蛋白質？化學 成分是否確定？甚至，生物反應器的形式以及下遊生產過 程都對產品有較大的影響。與生產過程和產品相關的雜質 是如何除去的？該產品是如何製備的，其穩定性如何？生 產商在確定化學相似性前，這些問題都必須予以回複。

第三個重要的考慮因素是微生物和病毒汙染物對產品 整體安全性的影響。在一些重要的用於生物反應過程的起 始原料上，很難做到避免病毒汙染，因為它們往往是動物 源的衍生產品。除了微生物、真菌和支原體汙染物外，它 們也能夠通過環境或操作人員，以外在的形式進入生產過 程中。因此，落實高效的檢測體係並設計如過濾、滅活以 及色譜分離等除去這些汙染物的過程，是非常關鍵的。

證明可比性的研究

進行可比性研究是提供生物相似性和產品安全性的重要 一環。該過程包括用以建立雜質圖譜和生物同一性的化學分 析測試以及展示產品療效和安全性的臨床前和臨床研究。

首先，必須進行化學分析流程。對於小分子仿製藥， 這相對簡單明了，隻要簡單證明該分子的化學特性是相同 的，比如晶體結構；對於生物仿製藥，這就要更為複雜 了，除了證明結構完全一致，研究還必須證明生物仿製藥 的結構和參照藥物足夠相近以至在生物活性上沒有功能性 差異。

通常，通過質譜來進行測量分子量，較常使用的有基 質輔助激光解析質譜，電噴射或者LC技術；通過包括十二 烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、HPLC 多肽圖譜、氨基酸測定在內的方法來研 究雜質和異構體以及結合碳水化合物含 量分析來評估糖基化結構。盡管通過這 些研究收集的信息可能相對有限，仍可 能采用圓二色譜評估多肽的高序結構。

雖然，更多關於高序蛋白質結構 的信息可以從生物相關的測試中得以確 定，但該過程仍需要檢測該產品的生物 活性。這些檢測結果必須與參照藥物 進行比較。盡管監管機構並沒要求參照藥物和仿製藥的 質量特性必須相同，但兩活性藥物間的任何細微的結構 差異或轉譯後修飾的變化都需要進行解釋說明，比如糖 基化結構。

下一個在檢測清單上，也是歐盟管理指南上重點突出 的——是需要證明生物仿製藥在相應的生物體係內，其效 能和參照藥品具有可比性。測量生物活性的效價測定，作為 穩定性研究項目的部分，必須進行研究，並進行批簽發。該 測定可以是細胞水平的體外測試，體內研究或者酶測定。細 胞水平測定包括配體結合測定、細胞增殖、細胞死亡和細胞 毒性研究，測量激活或抑製信號比如cAMP，評估細胞病變 效應以及報告基因測試。很可能的是，根據產品的作用機理 或複雜程度，需要進行不止一項的生物檢測。

細胞水平的效能測定通過動物研究具備諸多優勢，過 程快、節省成本並減少動物的使用數量。它們執行起來簡 單，比使用活體動物監管要求少，使生物藥品在其研發早 期階段顯現並證明和參照藥品具有相同的生物效應。 在大多數情況下，效能測定通過一係列的不同濃度樣 品評估該仿製藥品的生物活性，並在同樣的條件下與參照 藥品的效果進行比較。表1（雙劑量反應曲線）根據該藥 品屬於激動劑或拮抗劑，激活劑或者阻滯劑，顯示了其促 進或抑製的生物反應。

● 效能價測定通常在一係列的濃度樣品下測量該藥品 的生物活性

● 測試樣品效價時，包括一個特征明顯的參照標準對 比尤為重要

● 產生的劑量反應曲線可以描述刺激或抑製的生物 反應

● 效能通常展示了EC50（半數有效劑量）或IC50 （半數抑製濃度）劑量值，該劑量值誘導一半的最大響應。

這些在穩定性和生物活性上的測試，必須足夠敏感可 以顯示出微小的差異。用於測定的理想細胞株應來自與生 理相關的來源，若有必要，它們也可以基因工程產品。不 論哪種細胞源，對於應用於日常質量控製工作的測定，它 們必須特征明顯的、在測試中能夠以預設方式響應。驗證也非常重要，特別是如果測試的產品將用於後階段和商 業化。在這種情況下，依照ICH Q2（R1）規定，必須進 行完全驗證。盡管該過程很費時間，但對於認證產品卻 有必要。

盡管大部分的測試需在體內進行，但為了注冊文件要 求，需要進行一些動物研究，應該對這些研究予以設計， 最大化它們能夠提供的信息，這樣就會需要盡可能少的動 物。該測試將評估與藥物臨床使用相關的藥效和活性，包 括至少一項重複劑量毒性研究。進行中的藥代動力學研究 包括抗體滴度、交叉反應和中和能力。與全新的生物藥相 比，生物仿製藥的安全藥理、生殖毒性、致突變性以及致 癌性研究不是必需的。

最後，生物仿製藥和參照生物藥品的可比性必須通過 人體試驗來進行評估。第一階段的安全性試驗必須完成； 通常是在一群健康的誌願者中進行；第三階段的患者試 驗，必須將生物仿製藥的相對療效和參照生物藥品進行比 較。藥代動力學、藥效以及臨床效果應在該階段進行全部 評估。

甚者，一旦生物仿製藥批準上市，就應當建立藥物警 戒計劃。突出的問題比如免疫原性，患者如果對該產品產 生了意外的免疫反應，雖然很罕見，但還是會發生。

生物仿製藥未來

隨著歐洲生物仿製藥市場擴張至單克隆抗體領域、美 國市場的第一個生物仿製藥即將麵市，亞洲的生物仿製藥 生產商不光坐擁本土繁榮發展的潛力市場，在西方國家也 將收獲不斷增長的銷售機遇。

為了充分利用好這些新興的市場機遇，生產商們除了 需要滿足本土監管部門正式下發的要求外，還必須符合所 有目標市場監管部門要求的質量和檢測標準。有且僅有那 些能夠滿足全世界各國際和地區監管部門質量和安全要求 的公司，其生產的生物仿製藥擁有巨大的潛力市場