腺病毒構建服務

一、技術簡介：

重組腺病毒（Adenovirus）是一種目前最高效可靠的重組病毒表達係統之一，可用於在哺乳細胞中瞬時及高水平地表達shRNA或目的蛋白質。
其具備以下優點：
1. 宿主範圍廣：腺病毒除可感染一係列哺乳動物細胞,除可感染幾乎所有人的細胞類型外，還可感染包括大鼠、小鼠、兔、豬、羊、猴、雞等物種。
2. 因腺病毒的感染不依賴細胞周期，故其既可以感染增殖細胞也可以感染非增殖細胞。
3. 瞬時高效表達，不整合到基因組中。
4. 病毒滴度高，可用於動物水平的實驗。
 
本係統是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA為骨架、在克隆、包裝、擴增等各部條件做了改進和優化，達到了克隆陽性率更高，質量更可靠，包裝穩定，出毒迅速，滴度高等效果。所包裝的腺病毒已成功應用於凋亡檢測、染色質免疫沉澱（ChIP）、RT-PCR、Co-IP等科研實驗。
 

二、實驗步驟及周期：

1. 將目的基因插入腺病毒重穿梭質粒中，實驗周期為7個工作日， 如要求對載體的特定部件有所要求而需進行特殊改造，則此步實驗路線及實驗周期另行規定。
2. 將目的基因轉移至腺病毒骨架中，實驗周期為7個工作日。
3. 將確定正確的重組腺病毒質粒在293A細胞進行包裝，時間約為20個工作日。
4. 腺病毒擴增和CsCl純化，實驗周期為7個工作日。
5. 對包裝出的重組病毒進行質檢。
質檢包括對終產品病毒基因進行PCR和WB以確認目的基因的存在，實驗周期為5個工作日。
 

三、服務承諾：

1. 提供的病毒量為1ml滴度>1010VP/ml，如需更多量的病毒請具體再商洽。
2. 提供穿梭質粒，重組腺病毒質粒及相關酶切鑒定電泳圖，測序報告、終產物PCR或WB鑒定的實驗報告。
3. 為了確保服務質量，合同周期為在實驗周期的基礎上加10個工作日。
 

四、應用實例：

 
Fig1:Infection efficiency of Ad-Fos in CGNs. DIV5 CGNs were infected with Ad-Fos at MOI of 100. Thirty six hours after infection phase-contrast light and fluorescent micrographs of the infected cells were visualized. The cells infected with Ad-Fos were fixed and were stained with a Flag-specific M2 antibody or without a primary antibody (-1°). Infection efficiency of adenovirus is about 80%.