美問必答 | 基因毒性雜質破解法，你了解了嗎？

基因毒性雜質是指可能對生物體細胞的遺傳物質（DNA或RNA）造成損害的化合物或物質。這些雜質可能導致基因突變、染色體畸變、DNA斷裂等不良影響，進而影響細胞的正常功能和生長，甚至引發癌症等疾病。近年對基因毒性雜質的重視持續提升，引發了更多關於基因毒性雜質的研究和探討。在新藥研發的過程中，基因毒性雜質是我們不得不麵對一個重要的問題。對其進行充分的研究和評估至關重要，可以保障患者安全，提高藥物品質，符合監管要求，是新藥研發中的關鍵步驟之一。

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01 可以用mini-Ames 試驗代替Ames試驗嗎？

畢增：按照我們的經驗，在IND申報階段，雜質使用mini-Ames試驗可作為正式Ames試驗的替代材料進行申報。然而，在新藥上市申報和仿製藥上市申報時應該采用標準Ames試驗，要注意M7（R2）的注釋2所說的微量化測試並不是指mini-Ames試驗，是指待測化合物數量有限不能使用符合指導原則的試驗濃度時可以采取的措施。

02 仿製藥研發，每個雜質都需要進行軟件評估嗎？

畢增：是的，M7（R2）問答中明確建議對所有雜質進行模擬和評估。通過我直播中分享的案例，可以看到一些化合物，即使沒有基因毒性警示結構，也可能具有基因毒性。因此，即使某些化合物不在我們的警示結構列表中，仍需對其進行評估，因為它其實也是可能有基因毒性的。

03 如果有Ames試驗數據，還需要進行軟件評估嗎？

畢增：需要根據情況而定。如果數據庫收錄的Ames試驗是不是符合OECD指導原則或ICH S2的標準Ames試驗，即是否使用了5種菌株，並且在有代謝激活和沒有代謝激活兩種途徑下都進行了實驗，並且試驗應該是符合GLP規範的，在滿足以上前提的情況下，Ames試驗Negative，那麽就無需進行軟件評估，但是需要進行比較全麵的數據庫檢索。

04 是在藥品研發的哪個階段評估呢？

畢增：根據我的理解，需要根據每個項目的具體情況進行分析。我的建議是，在工藝穩定後，例如工藝路線已經確定並且優化工作已經完成後，在小試生產階段同步開展評估。在這個階段，通常不會對之前的工藝進行大幅調整，除非在後續放大過程中發現了一些問題，例如放大效應導致雜質超標或者收率較大幅度的。一般情況下，建議在小試驗階段進行相應的評估。這樣可以提前進行方法開發和簡單確認工作，並且隨著逐步放大的過程，積累數據，為後續的雜質控製策略提供數據支持。

05 Case ultra 預測合規嗎？CDE老師認可代替AMES實驗嗎？

畢增：這個是合規的，可以放心。因為我們完成的多個仿製藥項目，包括新藥的IND申報，還是客戶委托完成的發補的雜質預測，都有使用 Case ultra進行預測，都是沒有問題的。

Case ultra有Statistical Model（GT1_BMUT）統計學模型，該模型是通過RCA協議與美國FDA合作開發和驗證的模型，訓練集中包含13760個化合物；同時有Expert Rule Model（GT_EXPERT）專家規則模型，參考數據集中有17309個化合物作為參考數據集用於驗證規則。警示結構的數量有240個，包含普通的陽性警示結構，陽性減弱和陽性增強的子類型以及全局的陽性減弱的警示結構。

Case ultra可以滿足ICH M7同時使用兩種模型對化合物進行預測的要求，並且所有的模型都是進行過嚴格驗證的，可以查看後台數據，可以查看警示結構和相關細節，擁有明確的算法和良好的預測透明度，符合OECD的相關規則。

06 三氟甲磺酸那個案例中樣品本身就有三氟甲磺酸，這個水解方式還能行嗎？

畢增：這個案例是由於在方法開發初期，我們對API進行了三氟甲磺酸的檢測，並未檢出該雜質。基於這個結果，我采用這種檢測方法，如果樣品中本身就有三氟甲磺酸檢出，則會導致雜質被高估，這種情況下可以檢測水解後生成的另一個片段，比如說在案例中的3-羥基-2-硝基吡啶。

07 雜質的軟件評估都可以使用哪些軟件？

畢增：除了Case Ultra之外，Derek和Sarah也是同樣優秀的商業預測軟件。當然，除了商業軟件外，也有一些免費的軟件，比如VEGA GUI，我個人使用過該軟件，預測的結果並不明確。可能是因為軟件覆蓋的的數據庫相對較小，覆蓋的化合物種類也有限，導致用於訓練軟件算法的化合物數量較少，從而影響了計算結果的可靠性，合規性方麵有較大的挑戰，大家使用這類軟件的時候還是要慎重一些。

08 臨床上單次使用的局部給藥製劑中有一個雜質超過了界定限度，要做哪些安全性評價？

畢增：對於製劑中超過界定限度的雜質，建議按照ICH Q3B（R2）的附件3-降解產物鑒定和界定決策樹進行研究，首先要確定該雜質是否能降低至小於等於界定限，如果不能的話則考慮根據患者人群、用藥時間進行以下研究：致突變性研究（點突變、染色體畸變）、一般毒性研究（單個種類，通常14至90天）或者酌情考慮是否開展其他的毒性終點試驗。

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