卵巢早衰動物模型

臨床的卵巢早衰(POF)是指卵巢功能提前減退，常見為女性在40歲以前出現閉經，以閉經，不育，雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高為特征的一種疾病。在人群中發病率為1%~3%，在繼發性閉經中占2%~10%，診斷以至少半年或半年以上閉經多次發生，排除其他原因為基礎，卵巢早衰是婦科分泌領域的常見病。

POF病因多種多樣，具體發病機製尚不清楚，為了尋找病因和有效的治療方法，就必須建立與人類臨床表現和發病機製相似的動物模型。國內外專家學者根據POF的病因的多樣性建立了不同的動物模型。

1、材料與方法

1.1 實驗材料
雌性Wistar大鼠。

1.2 實驗動物分組
本實驗選用雌性Wistar大鼠40隻，體重260~300 g，隨機分成2組。正常對照組：20隻。實驗模型組：20隻。

1.3 實驗方法
1.3.1 POF大鼠模型製備 實驗模型組雌性Wistar大鼠用雷公藤多甙片(10 mg/片)，0.6 mg/(100 g•d)體重，灌胃1次/d，連續9d，建立POF動物模型。
1.3.2 組化標本製備
對實驗動物用1％戊巴比妥鈉(40ml/kg)腹腔麻醉後開胸，經左心室70滴/min滴入1％肝素鈉的生理鹽水500ml，同時剪開右心耳。繼用0.1m磷酸鹽緩衝液(PBS,PH=7.4)配製的固定液(含4％多聚甲醛)灌流固定。取出實驗動物的卵巢組織，放入含4％多聚甲醛PBS的固定液中進行後固定大約2h，之後將實驗動物的卵巢組織切成薄片移入含20％蔗糖的PBS中。在4℃冰箱中存放，至組織薄片沉底，經水包埋，恒冷箱連續橫切片，片厚20μm。經OCT包埋，恒冷箱連續切片，片厚16 μm，-70℃保存備用。
1.3.3 尼氏染色
冷凍切片吹幹，經PBS漂洗5min3次，將切片置入1%甲苯胺藍溶液中37℃孵育90min，取出後用蒸餾水衝洗，PBS漂洗5min3次，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，光濕微鏡下觀察。

2、結果

尼氏染色結果:
正常對照組大鼠卵巢的尼氏染色切片上，卵泡數目正常，卵泡無閉鎖，間質無明顯增生。
實驗模型組大鼠卵巢可見卵巢萎縮，卵泡數目減少，卵泡閉鎖增多，間質增生明顯。
根據尼氏染色結果證明POF動物模型製備成功。

3、討論

由於POF的病因與發病機理尚不清楚，為了尋找此病的有效的治療方法及發生發展規律，建立切實可靠的POF模型顯得由為重要。根據目前的各種造模結果來看，藥物型POF模型簡單可靠，容易操作，可作為研究POF的模型，但是由於方法還不夠成熟，需要更進一步的探討藥物的劑量與給要時間以造出最理想的模型。為臨床的治療提供有效數據，造模型的同時，更要探討對其他一些器官的影響。如肝、腎、神經係統等，這會對人類的健康具有更大的意義。