生物天生具有免疫功能，當細菌、病毒等侵入人體時，在免疫功能正常運作下，就算生病了也能治愈。獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）是由人類免疫缺陷病毒（HIV)所引起的傳染病，hⅳ所攻擊的正是人體免疫係統的中樞細胞—t4淋巴細胞，致使人體喪失抵抗能力。艾滋病是一種無法治愈的疾病，確診艾滋病，意味著要長期鬥爭，因免疫係統遭受HIV的毀滅性打擊，免疫功能遭到破壞而逐日低下，如果得不到有效控製，最終可導致一係列機會性感染和惡性腫瘤。在地球上，平均每分鍾都有一個孩子死於艾滋病，有超過1500萬的兒童因為艾滋病而失去父母。中國艾滋病病毒感染人數在全球居第十四位，更以每年百分之四十的速度遞增，防治艾滋病任重道遠，需要全社會共同努力。
Nef是一種HIV編碼的輔助蛋白，通過下調主要的組織相容性I類表達來躲避被細胞毒性T淋巴細胞（CTL）殺死，從而增強了致病性，因此急需要一種能恢複MHC-1的有效Nef抑製劑來促進免疫介導的HIV感染細胞的清除。研究人員發現在HIV感染的細胞中MHC-I的恢複伴隨著CTL介導的感染細胞清除率的提高，與Nef的基因缺失相當。因此研究人員提出CMA作為治療Nef的抑製性先導化合物，以增強免疫介導的HIV感染細胞的清除。
近日，發表在《PANS》上的一篇文章描述了一種藥物的發現，該藥物可以幫助免疫係統消除感染了HIV的難以殺死的細胞。HIV建立了無法治愈的持久性感染，因此需要開發新的方法來增強HIV感染細胞的清除率。HIV編碼Nef，它可以下調感染細胞中MHC-1的表達，從而損害細胞毒性T淋巴細胞的免疫介導清除。伴刀豆球蛋白A恢複了MHC-1，並通過細胞毒性T淋巴細胞增強了HIV感染的原代細胞的清除率。伴刀球黴素A抵消了針對多種MHC-1同種異型的HIV進化枝中的Nef，表明其具有廣泛的治療用途。
天然產物抑製劑的篩選
圖片來源：PANS
為了鑒定能夠逆轉HIV感染細胞中MHC-1下調的Nef抑製劑，研究人員進行了高通量流式細胞術篩選。選擇HLA-A2作為MHC-1的代表性等位基因，因為Nef強烈靶向HLA-A等位基因以進行下調，HLA-A2在不同族裔中含量很高，並且具有高親和力單克隆抗體有針對HLA-A2的選擇性抗體。篩選了20,000多種天然產物提取物，確定了37種在主篩選中為陽性，在計數器篩選中為陰性。
Plecomacrolides具有不同的Nef抑製作用和溶酶體中和能力
plecomacrolide治療相關的毒性可能是由其抑製V-ATPase引起的，V-ATPase抑製了許多細胞過程，包括溶酶體酸化。為了確定溶酶體pH的抑製是否可能導致表達Nef的細胞中MHC-1下調的逆轉，研究人員通過測量比例熒光來測量人類單核細胞衍生巨噬細胞的溶酶體pH內切葡聚糖。首先證實Baf A1完全中和了溶酶體pH，然後在一定濃度範圍內測試了每種plecoacrolides。有趣的是，Nef的最有效抑製劑CMA不是V-ATPase的最有效抑製劑。相反，Baf C1（EC 50 = 7.3 nM）比CMA（EC 50 = 12.7 nM，P < 0.0001）更有效地中和溶酶體，而CMA 與Baf A1（EC 50 = 18.5 nM，P = 0.06）具有可比性。
圖片來源：PANS
因為CD4 + T細胞不能有效地內切葡聚糖，所以用Lysotracker Red染料評估了這些細胞中的溶酶體中和作用，該染料可自由穿過細胞膜直至到達酸性隔室，並在那裏質子化並保留。如通過流式細胞術和共聚焦顯微鏡，則EC 50為在原代CD4溶酶體中和通過CMA + T細胞顯著抑製比EC 50更高Nef。綜上這些結果表明，CMA在無毒且不會改變溶酶體pH的濃度下抵消了CD4 + T細胞中的Nef 。
CMA與Nef的基因刪除相比可提高CTL介導的HIV感染細胞的清除
圖片來源：PANS
研究人員假設CMA可以消除Nef介導的HIV感染細胞免受HIV特異性CTL的保護，為了直接對此進行測試，進行了體外流式細胞術CTL殺傷測定。如先前觀察到的感染了Nef缺失病毒的PLAP +原代細胞被CTL有效清除，相反CTL介導的被Nef病毒感染的細胞的清除均明顯減少。然而，感染了Nef的病毒並用0.5 nM CMA處理的細胞恢複了HLA-A2的表達，並且PLAP +子集被CTL有效消除。CMA對殺死HIV感染的細胞的CTL的作用與Nef的基因缺失是無法區分的，因為感染Nef的病毒的細胞清除率沒有增加。重要的是，當將來自缺乏HLA-A2的供體的靶細胞與CTL共培養時，無論PLAP +靶細胞是否用CMA進行了處理都沒有減少，驗證了CTL的特異性並證明CMA僅在Nef和特異性抗HIV CTL反應同時存在時才增強HIV感染細胞的清除率。對於兩個測試的CTL克隆，Nef依賴性CMA處理細胞的殺傷率在統計學上均具有統計學意義（P < 0.0001）。這些觀察結果證實，低劑量CMA處理表達Nef的細胞可恢複HLA-A2，該蛋白正確加載了HIV衍生肽，可以成功地呈遞給CTL而不會損害對CTL衍生的裂解信號的響應性。
CMA逆轉了原代細胞中Nef介導的HLA-B的下調
圖片來源：PANS
研究人員試圖確定CMA是否會恢複HIV感染細胞中的HLA-B表達，HLA-B同種異型的序列差異將其分類為HLA-Bw4和HLA-Bw6血清型，每種血清型都可以用單克隆抗體檢測，但是這些抗體與某些HLA-A（Bw4）和HLA-C（Bw6）同種異型具有交叉反應。先前研究人員確定了一個供體，該供體對Bw4（B * 51：01）和Bw6（B * 07：02）是雜合的，並且與HLA-C的交叉反應性極小，這使研究人員可靠地測量兩個HLA-B等位基因的表達。觀察到在感染了ΔGPE的細胞中，HLA-B * 51：01和HLA-B * 07：02均顯著下調， Nef和CMA對該供體中兩個HLA-B等位基因的影響與一係列供體中HLA-A * 02的影響相似。因此得出結論，CMA可以有效抵消Nef介導的原代CD4 + T細胞中HLA-A和HLA-B同種異型的下調。
結果與討論
總而言之，與Nef的基因缺失相比，在HIV感染的細胞中恢複細胞表麵MHC-1可以提高CTL的清除率，從而證實了恢複的MHC-1具有呈遞病毒抗原的功能。此外，發現CMA在HIV感染的細胞中還原了MHC-1的多種同種異型，並且CMA處理增強了nef等位基因和MHC-1等位基因的所有組合的抗原呈遞，這些結果表明通過這種機製抑製Nef可能具有廣泛的臨床實用性。
此項研究仍有一些局限性需要進一步探索，CMA恢複了HIV感染的原代T淋巴細胞中多種MHC-1同種異型的表達，但僅對單一MHC-1同種異型確認了CTL殺傷，可能需要進一步降低毒性和對CTL的負麵影響或增強活性的化學修飾以用於臨床。此外，還需要使用動物模型進行其他研究，以確定CMA在體內的毒性和功效。數據表明，CMA有效地增強了CTL介導的清除作用，因此目前僅限於主動感染的原代T細胞，並且可能無法轉化為體內重新活化的靜止細胞的清除作用。
總之CMA可以有效地恢複免疫介導的HIV感染細胞的清除，這種方法有可能在不同的免疫環境中廣泛增強抗HIV免疫力。因此，研究人員建議將CMA作為進一步發展為Nef的治療抑製劑的先導化合物，這是目前通過消除殘留病毒庫來治療HIV的一項重要舉措。hjc黄金城在艾滋病的藥物研究方麵積累了多年的經驗，艾滋病藥物的藥代動力學和安全性評價等方麵的技術已經非常成熟，hjc黄金城會持續關注此項研究進展，望艾滋病藥物可以早日問世，造福全人類。
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