hjc黄金城酶活性測定服務

    上海hjc黄金城的生物部在體外生物學領域有豐富廣泛的經驗，通過酶水平測定、細胞水平測定、細胞生物學、生物化學、體外同位素測定、穩定細胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術等，提供一套完整的生物學服務。

    hjc黄金城酶水平測定服務項目

多種技術平台

        分析試驗

        AlphaScreen分析試驗

        Z’-LYTE分析試驗

        Adapta® 通用激酶分析

        Kinase-Glo® 激酶發光檢測分析

        ADP-GloTM 激酶檢測分析

        配體結合試驗

        酶聯免疫ELISA分析

        HTRF 均相時間分辨熒光檢測分析

多樣性靶點和應用

        激酶

        GPCR

        蛋白酶

        鉀-ATP酶

        轉錄因子

        細胞激素

        代謝酶

        生物標記

        蛋白結合

        蛋白相互作用

        化合物篩選

了解更多詳情 

    酶活性又稱酶活力，是指酶催化製定化學反應的能力。酶活力可以用一定條件下每次反應的速度來表示。反應速度愈快，就表明給定的酶溶液或組織提取液中的酶活力愈高。

酶活性的測定方法

按照對酶促反應時間的選擇不同分為：固定世間法、連續監測法
①固定世間法：測定酶促反應開始後一段時間內底物的減少量或產物的增加量。優點：簡單 缺點：難以確定反應時間段酶促反應是否處於線性期。
②連續檢測法：測定底物或產物隨時間的變化量，又稱為速率法。優點：能動態觀測酶促反應進程，可以明顯找到反應的線性期，結果準確可靠，標本和試劑用量少，可在較短時間內完成測定。缺點：對環境要求高，要求能夠精確地控製溫度，PH值和底物濃度等反應條件，要求儀器具有恒溫裝置及自動檢測功能。

酶活性測定的原理

直接測定反應生成物，酶促反應速率及其測定——以單位時間內反應物或生成物濃度的改變來表示。

酶活性測定方法

常見的酶活性檢測方法有：耦合反應、化學測定法、放射同位素法、測壓法、電極法、HPLC法等。

影響酶活性試驗的因素

①酶濃度
一般將底物過量，使酶可以充分與底物結合並發揮其催化功能。
②底物、輔因子的種類和濃度
1. 選合適的底物種類和濃度:
如所測的酶專一性不強，可作用於多種底物，首先就需決定選擇哪一類底物作為測此酶的底物。確定底物種類後，重要的問題是選擇底物的合適濃度。
2. 輔因子、活化劑的種類和濃度:
從廣義上說，凡能促進酶及反應物進入活化狀態從而加速酶催化反應的物質都能稱為輔因子，它包括種類很廣的物質。
③反應體係的最適pH、緩衝液的種類和濃度
在酶反應的其它條件不變的情況下，在不同pH下可得各種類型的酶活性與pH關係，將酶活性最高處的pH稱為最適pH 。
緩衝液含有大量離子，或影響酶蛋白的構型，或影響底物的解離程度等等，從而影響酶活性。
④溫度的控製
測定酶時都需要酶和底物在一定溫度下作用一段時間，在此期間，溫度有可能使酶失活，不同酶在此方麵差異很大，目前常規工作實驗室越來越多的使用37℃，溫度升高，反應速度快，靈敏度高。
不論選用何種溫度測酶，由於酶反應受溫度影響很大，在測定時間內，反應體係的溫度變化應控製在±0.1℃內。應用國產普通恒溫水浴箱來測酶活性是不合適的，應使用帶有攪拌器的高級恒溫水浴。
⑤其它影響酶活性因素
其它因素中，對酶活性測定而言，最重要的是抑製劑的作用。

酶活性檢測實驗設計和注意事項

平行試驗：酶活性測定中，為了消除係統和操作誤差，每次測定都要設置正常、異常對照，待測樣品設置雙份，取結果的平均值，並綜合本實驗室的正常值、對照管的結果。常常用容易失活的酶作參考酶同時測定，隻有當參考酶活性正常時才能肯定所得結果可靠，排除假陽性。
防止酶失活：這是實驗穩定、成功的關鍵。細胞分離、超聲粉碎、離心等操作都要在4°C條件下進行，標本采集後要立即進行處理。

酶活性測定反應終止方法

①改變PH值使蛋白質變性沉澱
②急熱100度
③用1%SDS中止反應，注意protease K等在SDS下仍有活性。
④金屬離子參與反應的，可加入EDTA
⑤加入抑製劑

⑥放射法測定時可加入大量非放射性基質

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    電話：02158591500

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