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新聞資訊

iTRAQ實驗技術服務

2017-06-27
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iTRAQ技術原理: 

iTRAQ試劑為可與氨基酸N端及賴氨酸側鏈連接的胺標記同重元素(isobaric)。在質譜圖中,任何一種iTRAQ試劑標記的不同樣本中的同一蛋白質表現為相同的質荷比。
在串聯質譜中,信號離子表現為不同質荷比(114~117)的峰,因此,根據波峰的高度及麵積,可以得到蛋白質的定量信息。 

iTRAQ試劑結構:

iTRAQ試劑是一種小分子同重元素化學物質,包括三部分:
一端是報告部分 reporter group;
另一端是肽反應部分 peptide reactive group;
中間部分是平衡部分 balance group。
其中: reporter group:質量為114Da、115 Da、116 Da、117 Da,因此iTRAQ試劑共四種。
• peptide reactive group:將reporter group與肽N端及賴氨酸側鏈連接,幾乎可以標記樣本中所有蛋白質。
• balance group:質量為31 Da、30 Da、29 Da、28 Da,使得四種iTRAQ試劑分子量均為145 Da,保證iTRAQ標記的同一肽段m/z相同。
圖1 iTRAQ 試劑結構
 
綜上:
    4個來源不同的相同蛋白樣品在一級質譜上表現相同;
    Balance group在二級質譜發生中性丟失;
    Reporter group 在二級質譜產生4個報告離子,分別是114、115、116和117;
    通過分析報告離子的峰強度比值就可以分析同一個蛋白在不同樣品間的表達量比值。

操作流程:

iTRAQ技術主要特點:

1.分離能力強、分析範圍廣
2.定性分析結果可靠,可以同時給出每一個組分的分子量和豐富的結構信息
3.MS具備高靈敏度、檢測限低
4.分析時間快,分離效果好
5.自動化程度高
6.iTRAQ技術不僅可發現胞漿蛋白,還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白7.iTRAQ技術可檢測出低豐度蛋白、強堿性蛋白、小於10KD或大於200KD的蛋白
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