蛋白純化服務公司

hjc黄金城生物醫藥在重組蛋白表達與純化服務方麵有10餘年經驗積累，hjc黄金城生物醫藥擁有多種蛋白表達協同，包括原核蛋白表達係統、酵母蛋白表達係統、昆蟲細胞蛋白表達係統（杆狀病毒）哺乳動物細胞蛋白表達係統，具備多種融合技術，可以為你在蛋白表達與純化方麵提供多種選擇。從方案設計、基因優化、表達條件優化到純化的技術體係，以提高您的目的蛋白表達水平。

hjc黄金城蛋白表達係統：原核蛋白表達係統（大腸杆菌表達係統）、酵母蛋白表達係統、昆蟲細胞蛋白表達係統(杆狀病毒表達)、哺乳動物細胞蛋白表達係統，hjc黄金城生物醫藥提供多種重組蛋白係統供你選擇，可以從價格、周期、優劣勢等方麵靈活選擇，滿足你不同的科研需求。

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  原核蛋白表達係統（大腸杆菌表達係統）

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  酵母蛋白表達係統

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  昆蟲細胞蛋白表達係統(杆狀病毒表達)

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  哺乳動物細胞蛋白表達係統

蛋白表達純化服務包括密碼子優化、基因合成、表達載體的構建、小規模的蛋白表達與純化和大規模的蛋白表達與純化等。大量純化的重組蛋白可用於藥物篩選、結構生物學研究、細胞生物學研究、蛋白質組學等的一係列生物醫學領域的研究。其中原核蛋白表達係統是迄今為止最為成熟可靠的蛋白表達係統，能快速表達純化各種不同來源的蛋白。hjc黄金城生物醫藥已成功構建完整的大腸杆菌原核和酵母細胞真核的蛋白表達技術平台，並可以根據客戶的需求，提供從蛋白表達質粒的構建、蛋白表達條件摸索和蛋白純化等一整套服務。

蛋白純化的原則

首先，必須了解待純化樣品中目的蛋白及主要雜質的性質，盡可能多收集有關蛋白質的來源、性質（分子大小、等電點）和穩定性（蛋白質對溫度、極端PH、蛋白酶、氧和金屬離子等的耐受性）等信息，這有助於設計蛋白質純化。

其次，純化開始之前必須了解最終產品的用途，從而設計蛋白質純化過程，同時要綜合考慮純化產品的質量、數量和經濟性等三個方麵的要求。純化後的蛋白質純度要多高，純化過程中能允許損失多少活性以及純化過程需多少時間和成本等都受到目的蛋白用途的影響。目的蛋白純度如果要求越高，往往所需要的操作時間越長，成本越高。

最後，充分了解各分離純化技術操作單元的大量信息也很重要，比如在細胞破碎時，需要了解包括流速、攪拌器類型、操作壓力、細胞濃度和種類、產品釋放的碎片和大小等；設計分析吸附色譜時，要了解包括色譜柱特征、凝膠或其他吸附劑的性能 （結合能力、解離常數、流速等）。

蛋白純化方法

蛋白純化方法的選擇和確定要根據不同蛋白質樣品的性質和具體的研究目的來決定。常用於初步提取和濃縮蛋白質的方法主要有吸附法、超濾法、沉澱法（如鹽析、有機溶劑沉澱、等電點沉澱和選擇性沉澱等）、透析法等。在要求高分辨率的條件下，通常采用色譜法（如凝膠過濾、離子交換、親和色譜和共價色譜等）和電泳法（如等電聚焦、雙向電泳、毛細管電泳和免疫電泳等）。這些分離純化方法的原理主要是基於蛋白質在溶解性、帶電荷性、分子量大小或親和特異性等方麵的差異。色譜技術和電泳技術在純化蛋白質方麵的研究和應用比較廣泛、深入。

常用蛋白純化技術介紹

目前，離子交換色譜已成為蛋白質分離純化中最常用的手段，統計顯示，在蛋白質的純化方案中，使用到離子交換色譜的占75%，其次是使用親和色譜和凝膠過濾色譜，分別占60%和50%。事實上，蛋白質的純化過程往往是將若幹純化技術聯合使用而實現的，在此過程中，選擇合理的純化技術固然很重要，然而如何將這些技術合理的組合和按順序使用也是進行成功分離所必須考慮的。

1、凝膠過濾色譜

凝膠過濾色譜技術是蛋白質研究領域內一種高效的分離純化手段。一方麵從理論上講，蛋白質樣品在凝膠柱內幾乎和固定相基質不發生任何作用，另一方麵樣品洗脫液均為含鹽或純水係緩衝液，而且整個操作過程中洗脫液組成不發生變化，所以該技術在分離純化蛋白質時具有操作方便、洗脫條件溫和、重複性好、不需要有機溶劑、樣品不易變性和回收率高等諸多優點。

主要應用：用於蛋白質的濃縮純化，分子量及其分布範圍測定，樣品脫鹽以及更換蛋白質緩衝液等。

主要考慮因素：凝膠的參數、體積參數、分配係數和有效分配係數、

2、離子交換色譜

用離子交換色譜分離生物分子的基礎是待分離物質在特定條件下與離子交換劑帶相反電荷因而能夠與之競爭結合，而不同的分子在此條件下帶電荷的種類、數量及電荷的分布不同，表現出與離子交換劑在結合強度上的差異，在離子交換色譜時按結合力由弱到強的順序被洗脫下來而得以分離。

離子交換色譜的特點：

①分辨率高，隨著各種高效色譜介質的出現，選擇合適的離子交換劑能夠確 保 離 子交換色譜有著良好的選擇性和分辨率；

②蛋白交換容量高，有利於放大分離規模和在工業生產中應用，而這一點是凝膠 過 濾 等 方 法 很 難 達 到 的；

③ 應 用 靈活，通過選擇不同的離子交 換 劑，控製緩衝液的組成和 ｐＨ、離子強度條件可以優化分離過程；

④分離原理比較明確，該技術是依據電荷不同進行分離的，不過對於蛋白質這樣的大分子，除了靜電作用外，疏水相互作用、氫鍵等非離子作用以及緩衝離子的性質也會影響到分離行為；

⑤操作簡單易行，在 大 規模分離樣品而分辨率要求又並不高時，對蛋白質進行吸附和解吸甚至可以不用在色譜柱中進行。

3、親和色譜

親和色譜是利用蛋白質分子的生物學活性，而不是利用其物化特性來進行分離，即以蛋白質和配體之間的特異性親和力作為分離的基礎，因而具有高度選擇性，其純化程度有時可高達1000倍以上，因此親和色譜是一種非常有效的蛋白質純化方法，多用於從大量的複雜溶液中分離少量的特定蛋白質，且這種純化方法同時具有濃縮的效果。有時僅用親和色譜一步分離過程，就能達到快速而且滿意的蛋白質純化效果，這是其他純化方法所無法比擬的。

親和色譜中蛋白質與配體之間的結合類型主要有：酶的活性中心或別構中心通過次級鍵與專一性底物、輔酶、激活劑或抑製劑結合，抗原與抗體，激素等與其受體，生物素與抗生物素蛋白／鏈黴抗生物素蛋白，糖蛋白與凝集素等的結合。

4、共價色譜

用來分離蛋白質和其他生物大分子的色譜技術，如離子交換色譜和疏水相互作用色譜都是基於待分離的分子和吸附劑之間的非共價相互作用而實現的，而共價色譜則是應用固定相與溶質之間共價鍵的形成或斷裂來實現分離。

通常用於生物活性蛋白的色譜技術，要求在溫和的條件下，既能形成穩定的鍵，又能在釋放固定蛋白時不破壞其結構。

5、電泳技術

電泳就是在電場作用下，帶電膠體顆粒向著與其電性相反的電極移動，其分離原理是基於生物大分子的電荷密度。

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